L'un des milieux les plus riches des jardins naturels est sans doute le sous-bois. Une faune et une flore caractéristiques s'y maintiennent, préservées des interventions humaines.

A la lisière, arbres et arbustres profitent de la lumière, à l'intérieur les plantes d'ombres, les ronces recouvrent le sol.

La litière, accumulation de feuilles, d'écorces et de bois morts en décomposition est un milieu très riche. Toute une vie permet à la matière organique de se décomposer.

Le sous-bois offre un refuge et un garde-manger pour de nombreuses espèces vivantes et devient donc ainsi un support éducatif par excellence.